Un cofacteur est une substance chimique de nature non protéique, mais qui est liée à une protéine, et dont la présence est nécessaire à l’activité biologique de cette dernière, qui est en règle générale une enzyme.
Il existe deux catégories de cofacteurs : les ions métalliques, nécessaires au maintien de la structure de l’enzyme, et les coenzymes, qui favorisent l’activité enzymatique. Les coenzymes qui sont faiblement liés à l’enzyme sont des « cosubstrats » ; ceux pour lesquels la liaison avec l’enzyme est forte sont des « groupements prosthétiques ».
Curieusement, alors que le mot enzyme est féminin, le mot coenzyme est habituellement considéré comme masculin.
Certains coenzymes sont bien connus : le coenzyme A en biochimie, le coenzyme Q10 en cosmétologie.